单蕊黄芪内生真菌的分离鉴定及其次级代谢产物生物活性的研究

【摘要】植物内生真菌是一类具有高度多样性的微生物资源,其代谢产物丰富多样,且能够产生与宿主植物相同或相似的化学成分,因此被人们认为是抗菌、抗氧化、抗肿瘤以及杀虫等天然活性物质的重要来源。黄芪属植物具有多种药理作用,并在临床上有着广泛的应用。本论文采用活性追踪的方法,对药用植物单蕊黄芪根部的内生真菌及其次级代谢产物进行了研究。内容包括：单蕊黄芪内生真菌的分离鉴定；抑菌活性研究；抗氧活性研究；活性成分的追踪分离。现概括如下：(1)以健康的单蕊黄芪根为研究对象,采用组织块分离法,分离得到13株内生真菌,经过分子生物学的方法鉴定其中7株真菌属于半知菌亚门和子囊菌亚门,分布于6个属：曲霉属(Aspergillussp.)2株、青霉属(Penicilliumsp.)、枝顶孢霉属(Acremoniumsp.)、喙枝孢属(Rhinocladiellasp.)、链格孢属(Alternariasp.)和镰孢霉属(Fusariumsp.)各1株。(2)采用滤纸片法对13株内生真菌的发酵产物共39个样品进行抑菌活性研究。结果表明：14个样品对指示菌有不同程度的抑菌作用,占样品总数的35.89%,其中有11个样品属于乙酸乙酯部位。H601和H803的乙酸乙酯部位对6种指示细菌均表现出了较强的抑菌活性,因此以这两个样品为研究对象,作最小抑菌浓度实验,结果显示：H601和H803对6种指示菌的最小抑菌浓度能达到0.25mg/mL。(3)通过总还原力的测定(铁氰化钾还原法)、清除·OH活性测定和清除DPPH-活性测定这3个方面,对13株内生真菌发酵产物的抗氧化活性进行研究。结果如下：总还原力测定结果：所有样品都表现出了不同程度的还原能力。在同等浓度下H401的乙酸乙酯部位和菌体部位的还原力比其它样品要强,但略低于阳性对照Vc。清除·OH的活性测定结果：样品对·OH的清除作用有较大差异。清除率大于70%的有7个样品,占总数的17.95%,其中H802菌体部位样品对·OH的清除能力较Vc强。清除DPPH-活性测定结果：所有样品对DPPH-的清除率都达到了50%以上,同时,乙酸乙酯部位样品对DPPH·的清除能力强于其它2个部位,有4个样品的清除率达到了80%以上,其中H401对DPPH-的清除能力要强于阳性对照Vc。(4)通过扩大培养,常规的薄层层析、硅胶柱层析和制备薄层等分离方法,从菌株H401发酵液的乙酸乙酯提取物中分离得到一个单体化合物——β-谷甾醇,进一步研究发现,该化合物没有抗氧化活性。
【作者】李娟；
【导师】李志忠；王治业；
【作者基本信息】兰州理工大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】黄芪；内生真菌；菌株鉴定；抑菌活性；抗氧化活性；化学成分分离；

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